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摘要
目的初步探索Toll样受体(TLR)/NO通路在高危型HPV阳性的子宫颈癌组织和细胞中的表达及意义。方法 (1)选取2012年11月1日至2013年5月20日在复旦大学附属妇产科医院就诊的高危型HPV阳性的子宫颈鳞癌患者(宫颈癌组)及经病理检查诊断为正常子宫颈的高危型HPV阳性患者(对照组)各36例, Greiss法检测两组患者宫颈管NO含量;免疫组化SP法检测两组患者子宫颈组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表达;激光显微切割(LCM)技术获取两组患者子宫颈组织中的鳞状上皮细胞, 采用逆转录(RT)-PCR技术检测所获鳞状上皮细胞中TLR/NO通路中关键基因[包括TLR3、TLR4、TLR7、TLR8、TLR9、核因子κB(NF-κB)p65、iNOS]mRNA的表达水平;将宫颈癌组和对照组中表达差异最为显著的TLR(为TLR4)用于后续研究。(2)选用子宫颈癌细胞系CaSki(HPV16阳性)、HeLa(HPV18阳性)和C33a(HPV阴性), 采用RT-PCR技术和蛋白印迹法(western blot)分别检测CaSki、HeLa和C33a细胞中TLR4、NF-κBp65、iNOS mRNA和蛋白的表达, 采用细胞免疫荧光法检测CaSki、HeLa和C33a细胞中TLR4蛋白的表达。结果 (1)宫颈癌组宫颈管NO含量为(42.92±0.36)μmol/L, 对照组为(15.49±0.24)μmol/L, 两组比较, 差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组和对照组子宫颈组织中iNOS蛋白的阳性表达率分别为75%(27/36)、6%(2/36), 两组比较, 差异有统计学意义(P<0.05);iNOS蛋白的表达与子宫颈鳞癌患者年龄、肿瘤大小和临床分期无关(P>0.05);而与有无淋巴结转移、淋巴血管浸润明显相关(P<0.05)。宫颈癌组子宫颈组织鳞状上皮细胞中TLR3、TLR4、TLR7、TLR8、NF-κBp65、iNOS mRNA的表达水平分别为4.80±0.32、7.41±0.39、2.90±0.14、2.02±0.26、3.09±0.16、2.88±0.17, 对照组分别为1.21±0.12、1.86±0.21、1.25±0.11、1.22±0.14、0.48±0.15、0.27±0.11, 宫颈癌组均高于对照组, 分别比较, 差异均有统计学意义(P<0.05), 其中宫颈癌组与对照组中表达差异最为显著者为TLR4;而两组间TLR9 mRNA表达水平(分别为0.79±0.05、0.93±0.07)比较, 差异则无统计学意义(P>0.05)。(2)RT-PCR技术和蛋白印迹法检测显示, HeLa和CaSki细胞中TLR4、NF-κBp65和iNOS mRNA和蛋白的表达水平均高于C33a细胞, 分别比较, 差异均有统计学意义(P< 0.05)。细胞免疫荧光法检测显示, HeLa、CaSki、C33a细胞中TLR4蛋白表达水平(以积分吸光度表示)分别为3 599±427、2 080±456、730±96, 两两比较, 差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高危型HPV阳性的子宫颈癌组织和细胞中TLR4/NO通路关键基因表达水平增高, 推测TLR4/NO通路激活可能参与了高危型HPV感染所致子宫颈癌的形成过程。
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单位复旦大学附属妇产科医院; 复旦大学
