华支睾吸虫mGST新基因的克隆、表达与纯化(英文)

作者：伍忠銮; **; 吴忠道; 徐劲; 余新炳

来源：中国寄生虫病防治杂志, 2005, (05): 31-33.

• 华支睾吸虫
• 谷胱甘肽转移酶
• 克隆
• 基因表达
• 纯化

目的扩增华支睾吸虫一个微粒体谷胱甘肽转移酶( mGST)新基因,明确是否存在内含子,并进行原核表达与纯化。方法用PCR方法分别从华支睾吸虫成虫cDNA(质粒)文库和基因组DNA中扩增mGST基因并测序,将编码基因定向克隆到原核表达载体pET-30a( +) ,在大肠埃希菌BL21/DE3中表达,按照Ni-NTA agarose说明书纯化重组蛋白,用SDS-PAGE和TLC分析。结果mGST基因全长486 bp ,没有内含子,构建的原核表达质粒pET-30a( +)-mGST在大肠埃希菌中得到了有效表达,融合蛋白的分子质量单位约为24 ku。重组蛋白达细菌总蛋白质的11 %,纯化后的重组蛋白纯度为83 %。结论mGST基因没有内含子,在大肠埃希菌中能有效表达,得到了纯化的重组蛋白,为进一步研究其功能奠定了基础。

• 单位
  中山大学; 中山大学生命科学学院; 基础医学院