乙型脑炎减毒活疫苗病毒滴定用BHK21细胞密度和代次的确认

作者：易维维; 彭维; 刘晓华; 江虹霞; 廖海棠; 马玉晓; 吕钢; 杨文杰; 刘菊; 卓金蓉^*

来源：国际生物制品学杂志, 2018, 41(06).

• 日本脑炎疫苗
• BHK21细胞
• 细胞密度
• 细胞代次
• 病毒滴定

目的确定乙型脑炎(乙脑)减毒活疫苗病毒滴定使用的BHK21细胞的密度和代次范围。方法抽取20批不同代次BHK21细胞在6孔细胞板内培养成单层,进行细胞计数,计算细胞密度,滴定同批次乙脑病毒滴度国家参考品。将BHK21细胞从P95传代至P105,观察细胞形态及生长情况,与已用于检定的BHK21细胞(<P95)对比。用P95-P105 BHK21细胞重复6次滴定同批参考品,对滴度结果进行双因素方差分析,并与<P95 BHK21细胞的病毒滴度检测结果进行趋势分析比较。结果 20批6孔板单层BHK21细胞密度均值1. 55×106个/ml,差异较大(95%置信区间:7. 89×104～3. 02×106个/ml)。病毒滴度结果均在规定范围内(6. 48～7. 12 lg蚀斑形成单位/ml,相对标准偏差<5%),单层细胞密度对滴度结果无显著影响。P95-P105 BHK21细胞的生长情况及细胞形态与<P95基本一致,病毒滴定结果均在规定范围内。不同试验次数(F=0.13,P=0.7214)、不同细胞代次(F=1.17,P=0.337 6)及两者的交互作用(F=0.30,P=0.978 0)对检测结果的影响无统计学意义,试验结果与较低代次细胞(<P95)检测的结果趋势一致,均整体稳定。结论 BHK21细胞可连续传代至P105用于乙脑减毒活疫苗病毒滴定,且单层BHK21细胞密度对滴度检测结果无显著影响。

• 单位
  成都生物制品研究所有限责任公司