科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
为获得肠炎沙门氏菌（Salmonella Enteritidis） SEF14菌毛操纵子sef14结构基因并验证其生物学功能，本研究以肠炎沙门氏菌标准株SE50336为模板，PCR扩增含分泌信号肽的sef14操纵子基因片段，并克隆至表达质粒载体pBR322中，构建重组质粒pBR322-sef14，将该重组质粒转化至经修饰且不含任何菌毛的大肠杆菌SE5000M株中，获得重组菌SE5000M+SEF14，该重组菌仅与肠炎沙门氏菌感染的阳性SPF鸡血清反应，能够在两分钟内用肉眼观察到清晰的凝集颗粒，而不与鸡白痢、鸡伤寒、鼠伤寒沙门氏菌阳性鸡血清反应。本实验室制备的SefA （SEF14菌毛的主要亚基）单克隆抗体特异性识别该重组菌并产生明显的肉眼可见的凝集反应。利用透射电镜和免疫电镜观察上述重组菌并通过SDS-PAGE和Western blot鉴定，重组菌表达的SEF14菌毛产物大小约为14.3 ku，与菌毛的主要亚基SefA的大小一致，电镜观察到重组菌表面有明显的菌毛结构。本研究首次克隆了肠炎沙门氏菌sef14操纵子基因，并在体外成功表达和功能性验证，上述研究结果为进一步研究SEF14菌毛，建立特异性诊断技术平台方法和深入研究提供基础。
- 单位
