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摘要
目的·探究乳腺癌易感基因1 (breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)第1325位精氨酸变为赖氨酸（R1325K突变）对胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ增殖和凋亡的影响。方法·使用BRCA1野生型过表达慢病毒、BRCA1 R1325K突变过表达慢病毒以及阴性对照慢病毒载体构建胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ稳转株。细胞分为不含目的基因的对照组、BRCA1野生型组及BRCA1突变组，并通过Western blotting验证目的蛋白BRCA1的表达情况。选用针对BRCA1突变的抑制剂奥拉帕利（Olaparib） 20μmol/L处理BRCA1突变组胆囊癌细胞，并根据目的蛋白的表达情况和加药与否将胆囊癌细胞系分为对照组、BRCA1野生型组、BRCA1突变组和BRCA1突变+Olaparib组。通过CCK8实验和克隆形成实验观察BRCA1R1325K突变对胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ增殖能力及克隆形成能力的影响，通过TUNEL实验观察BRCA1 R1325K突变对胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ凋亡情况的影响，并通过Western blotting检测凋亡相关蛋白cleaved PARP、Bcl-2和Bax的表达情况。使用抑制剂Olaparib处理BRCA1 R1325K突变过表达胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ，并检测BRCA1 R1325K突变引起的相应表型改变（促进增殖、增强克隆形成能力和抑制凋亡）是否能被抑制剂所逆转。结果·通过CCK8实验和克隆形成实验发现：相较于对照组及BRCA1野生型组，BRCA1 R1325K突变能够促进胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ的增殖，并提高其克隆形成能力；抑制剂Olaparib处理则能够抑制BRCA1突变胆囊癌细胞系的增殖（均P<0.05）。通过TUNEL和Western blotting实验发现：相较于对照组，野生型BRCA1基因过表达能够诱导胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ的凋亡；BRCA1突变组相较于对照组和BRCA1野生型组，有抵抗凋亡的作用，且升高了凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达并降低了促凋亡蛋白Bax的表达（P<0.05）。结论·BRCA1 R1325K突变能够促进胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ的增殖并抑制其凋亡。
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单位上海交通大学医学院附属仁济医院; 上海交通大学医学院附属新华医院
