本发明公开了一种制备羟基脂肪酸的方法,将脱胶副产物溶解在乙腈中,超声分散,离心去除沉淀,得到有机相,将磷脂酶B、磷脂酶D、非特异性过氧合酶和胆碱氧化酶溶于缓冲液中,将有机相与复合酶液混合,反应至少1h,制得羟基脂肪酸。本发明为催化合成羟基脂肪酸提供了新思路,实现了油脂脱胶副产物的循环利用,减少了工业浪费。