地高辛标记Ucp2基因RNA探针的制备和应用

作者：刘志贞; 加三三; 张凯丽; 孙雨晴; 赵虹; 郝宇卉; 牛勃; 李美宁^*

来源：中国生物工程杂志, 2018, 38(09): 55-58.

DOI：10.13523/j.cb.20180908

• Ucp2 RNA探针
• 全胚胎原位杂交

目的:制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法:提取小鼠胚胎脑组织总RNA,设计引物,通过RT-PCR方法获取Ucp2基因片段,将其克隆到pGEM-T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物,PCR扩增获得转录模板,通过Sp6及T7 RNA聚合酶,获得地高辛标记的正义、反义Ucp2 RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后,通过全胚胎原位杂交分析制备探针的特异性和杂交效果。结果:成功获得Ucp2基因正义、反义探针,反义探针能高效灵敏检测到Ucp2基因在小鼠胚胎Ed9.5、Ed10.5神经系统呈现高表达,而正义探针未能检测到表达信号。结论:成功制备了特异高效的地高辛标记Ucp2 RNA原位杂交探针,为进一步研究Ucp2基因在小鼠胚胎组织中的表达,尤其在神经组织的定位奠定基础。

• 单位
  首都儿科研究所; 山西医科大学; 忻州职业技术学院; 第四军医大学