HSP90高表达细胞株的建立及细胞应激反应的改变

作者：陈雪梅; 邹飞

来源：中国病理生理杂志, 2004, (04): 30-34.

• 热休克蛋白质90
• NIH-3T细胞
• 转染
• 应激

目的 :建立稳定高表达热休克蛋白 90 (HSP90 )细胞株 ,研究HSP90高表达对细胞应激反应的影响。方法 :含人HSP90 β全长基因的重组质粒pSmycHSP经克隆、纯化、酶切鉴定后 ,用电穿孔法转染到小鼠成纤维细胞系NIH - 3T3细胞内。经G4 18筛选、克隆分离培养 ,用免疫荧光、免疫印迹鉴定阳性克隆。用高温作用 (44℃ ,2 0min、4 0min)模拟氧化应激环境 ,以转染空质粒的NIH - 3T3细胞为对照 ,全自动生化分析仪观测培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)漏出活性变化、流式细胞仪测定DNA受损细胞数 ,分析细胞应激状态对细胞膜和DNA的损害及HSP90高表达对细胞应激反应的影响。结果 :转染pSmycHSP的NIH - 3T3细胞HSP90免疫荧光染色增强 ;与对照相比 ,4 4℃ ,2 0min时培养液中漏出的LDH无显著差别 ,DNA损害加重 ;4 4℃ ,4 0min时LDH漏出减少 ,DNA的损害减弱。结论 :已建立稳定高表达HSP90NIH - 3T3细胞株 ;HSP90高表达在不同的应激强度下对细胞的影响呈现复杂性 ,其应激保护作用与应激强度密切相关。

• 单位
  南方医科大学