瑞戈非尼通过CSF1-R信号通路调节肿瘤相关巨噬细胞增强PD-1抗体在结直肠癌中疗效的研究

作者：苏燕燕^*; 杨翀; 张宗祥; 叶宇; 应佳可

来源：浙江中西医结合杂志, 2023, 33(10): 909-914.

• 小鼠
• 结直肠癌
• 瑞戈非尼
• CSF1-R信号通路
• 肿瘤相关巨噬细胞

目的 探讨瑞戈非尼(Reg)通过集落刺激因子(CSF1-R)信号通路调节肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)增强PD-1抗体(PD-1 antibody,anti-PD-1)在结直肠癌中的疗效,并分析其机制。方法 接种结肠癌细胞CT26于24只BALB/c小鼠,建立结直肠癌移植瘤模型,模型小鼠采用随机数字表法分为CT26组、CT26+Reg组、CT26+anti-PD-1组和CT26+Reg+anti-PD-1组4个组,每组6只,进行药物治疗后观察荷瘤小鼠移植瘤的生长情况。取肿瘤组织,通过Western Blot和免疫组化检测瘤内磷酸化CSF1-R(p-CSF1-R)和CSF1-R表达,流式细胞术检测肿瘤单细胞悬液中TAMs并区分M1、M2表型。提取小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDMs),分别诱导成M1、M2型巨噬细胞,并用Reg处理细胞,qRT-PCR检测相关基因表达水平,Western blot检测巨噬细胞表面CSF1-R蛋白表达。结果 与CT26组比较,药物处理后肿瘤体积[(1174.33±56.84)mm3、(1221.00±42.42)mm3、(949.50±15.92)mm3比(1451.00±43.10)mm3]和重量[(2.32±0.08)g、(2.40±0.10)g、(1.73±0.08)g比(3.04±0.06)g]均显著减小,与单独使用Reg或anti-PD-1比较,Reg和anti-PD-1联合用药物使移植瘤的体积[(949.50±15.92)mm3比(1174.33±56.84)mm3、(1221.00±42.42)mm3]和重量[(1.73±0.08)g比(2.32±0.08)g、(2.40±0.10)g]进一步减小;Western blot和免疫组化结果显示,Reg处理后,瘤内p-CSF1-R表达显著下调(P<0.05);流式结果显示Reg处理后,M2型巨噬细胞比例显著下降[(13.67±1.80)%比(35.33±2.21)%、(21.33±2.36)%、(28.67±1.89)%,(P<0.05)],M1型巨噬细胞比例显著增加[(19.00±2.00)%比(5.50±0.96)%、(12.50±1.71)%、(8.00±0.82)%,(P<0.05)];qRT-PCR结果也表明,Reg处理能增加BMDMs中M1表型比例[IL-23:(1.98±0.08)比(1.00±0.05);IL-12:(3.10±0.12)比(1.00±0.10);CD86:(2.56±0.13)比(1.00±0.10)],并下调M2表型比例[Arg1:(0.57±0.04)比(1.00±0.09);CD206,(0.73±0.08)比(1.00±0.15);CD163:(0.81±0.07)比(1.00±0.20)],同时Western blot结果显示,Reg处理能显著下调M2型巨噬细胞表面p-CSF1-R蛋白的表达水平(P<0.05)。结论 Reg可能通过CSF1-R信号通路调控TAMs,增强anti-PD-1在结直肠癌中的疗效。

• 单位
  杭州市红十字会医院