低氧状态下骨细胞参与破骨细胞形成的作用机制研究

作者：朱杰; 唐燚; 吴情; 纪映辰; 康非吾^*

来源：华西口腔医学杂志, 2019, 37(05): 463-468.

• 去铁胺甲磺酸
• 低氧诱导因子-1α
• 核因子κB受体活化因子配体

目的探究低氧状态下骨细胞对破骨细胞形成的作用及其机制。方法用去铁胺甲磺酸(DFO)刺激骨细胞系MLO-Y4建立体外低氧骨细胞培养体系。CCK-8实验检测DFO对MLO-Y4细胞增殖活性的影响;采用DFO处理后的MLO-Y4细胞培养液制备条件培养基诱导RAW264.7细胞分化,行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测;利用实时荧光定量聚合酶链反应、细胞免疫荧光和蛋白质印迹(Western blot)检测DFO作用下MLO-Y4表达低氧诱导因子(HIF)-1α与核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的情况;检测HIF-1αsiRNA转染对MLO-Y4表达HIF-1α和RANKL的影响。结果 100μmol·L-1 DFO作用24 h时MLO-Y4增殖活性升高,之后随着时间延长细胞增殖活性下降(P<0.01)。加入可溶性RANKL后,低氧组可见破骨细胞形成明显增加(P<0.001)。100μmol·L-1 DFO作用下,HIF-1αmRNA表达稳定,RANKL mRNA的表达随时间明显变化,24 h时最高(P<0.01);HIF-1α、RANKL蛋白表达升高(P<0.01)。低氧状态下siHIF-1α转染可降低HIF-1α和RANKL的表达(P<0.01),破骨细胞减少(P<0.01)。结论低氧状态下MLO-Y4可通过上调HIF-1α的蛋白水平促进RANKL的生成,进而加速RAW264.7细胞向破骨细胞分化。

• 单位
  同济大学附属口腔医院; 同济大学