基于XcmⅠ酶切的高效TA克隆载体的构建

作者：顾頠; 张昕; 安小平; 陈锦辉; 刘大斌; 张宝中; 周育森; 童贻刚

来源：生物技术通讯, 2008, (03): 386-388.

• T载体
• 限制性内切酶XcmⅠ
• 聚合酶链反应 T-vector
• XcmⅠ
• polymerase chain reaction

目的:制备基于XcmⅠ酶切的高效TA克隆载体,并检测其克隆PCR产物的效果。方法:设计一对互补配对的寡核苷酸,经过变性及退火后插入质粒pUC19的多克隆位点,从而在该多克隆位点中引入2个XcmⅠ酶切位点,用XcmⅠ酶切后即获得含有3'突出T碱基的T载体;为了提高该T载体的克隆效率,优化了2个XcmⅠ酶切位点之间的碱基数目,排除了载体自连产生白色克隆的可能性,使假阳性大大减少;此外,为了便于完全酶切与未完全酶切载体的分离,在2个XcmⅠ之间插入了一段无关DNA片段。结果:改进得到的T载体可以有效克隆PCR产物,其阳性克隆率可达95%。结论:构建了基于XcmⅠ酶切的TA克隆载体,经过改进的T载体具...

• 单位
  军事医学科学院; 病原微生物生物安全国家重点实验室; 济南军区联勤部疾病预防控制中心