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摘要
【目的】探究金雀异黄酮对冻融猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及获能相关基因的影响,为丰富猪精子冷冻保存技术的理论基础及后续开展蛋白酪氨酸激酶抑制剂对冻融猪精子获能影响研究提供参考依据。【方法】采集猪精液后,设精液冷冻对照组(CK组)、100.0μmol/L金雀异黄酮冷冻处理组(G组)和鲜精组(F组),使用Western blotting、SDS-PAGE、免疫荧光、ELISA和实时荧光定量PCR等检测各组精子的蛋白酪氨酸磷酸化水平、精子不同部位蛋白酪氨酸磷酸化位点变化情况、蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶G(PKG)活性及黏附蛋白家族基因(AQN1、AQN3、AWN、PSP-Ⅰ和PSP-Ⅱ)和精子运动抑制因子(SPMI)基因mRNA的表达水平,分析金雀异黄酮对冻融猪精子的保护机制。【结果】与CK组相比,G组的32和69 kD蛋白酪氨酸磷酸化水平、顶体+顶体后区磷酸化位点、PKA活性显著降低(P<0.05,下同);AWN基因相对表达量极显著升高(P<0.01,下同),PSP-Ⅰ基因相对表达量显著降低,PSP-Ⅱ和SPMI基因相对表达量极显著降低。F组中未检测到32和69 kD蛋白酪氨酸磷酸化,而37和58 kD蛋白酪氨酸磷酸化水平和PKA活性显著降低;AQN1、AQN3和AWN基因相对表达量极显著升高,PSP-Ⅱ基因相对表达量显著降低,SPMI基因相对表达量极显著降低。【结论】金雀异黄酮既能降低冻融猪精子顶体+顶体后区蛋白酪氨酸磷酸化水平,且PKA活性降低可能与p32和p69蛋白表达量降低有关,又可有效提高冻融猪精子中AWN基因及有效降低PSP-Ⅰ、PSP-Ⅱ和SPMI基因的表达量,在一定程度上提高冻融猪精子质量。
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