欧洲型黄瓜ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

作者：李丽琼; 阳世莹; 陈光平; 木万福; 吕维梧; 李易蓉; 杨龙; 但忠

来源：分子植物育种, 2022, 1-20.

• 欧洲型黄瓜
• ISSR-PCR反应体系
• 引物筛选

为实现分子标记在欧洲型黄瓜育种中的大规模应用，探究适用于欧洲型黄瓜的ISSR最优反应体系和最佳ISSR引物。本研究利用单因素试验和正交设计L16(45)，分析Mg2+、dNTP、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA浓度等5个因素对欧洲型黄瓜ISSR-PCR反应体系的影响。研究表明Taq酶、dNTP以及引物浓度对PCR扩增效果有显著的影响，而DNA模板浓度对PCR扩增效果无显著影响；欧洲型黄瓜ISSR-PCR最适反应体系（20.0 μL）为：10×PCR Buffer 2.0 μL、DNA模板30 ng、0.6 μmol/L引物、0.25 mmol/L dNTPs、3 U Taq DNA聚合酶、2.5 mmol/L Mg2+；利用优化后的反应体系，从100条ISSR引物中筛选获得31条（占31%）扩增条带清晰和多态性丰富的引物。本研究为解析欧洲型黄瓜种质资源遗传多样性，构建指纹图谱及定位基因等提供参考。

• 单位
  云南省农业科学院热区生态农业研究所