miR-142通过上调AKT2的表达促进角膜新生血管形成

作者：沈厉; 周善璧; 毛旖旎; 林天兰; 岑超; 胡雁; 侯胜平

来源：重庆医科大学学报, 2018, 43(07): 988-993.

DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.001629

• 角膜新生血管
• 人脐静脉内皮细胞
• miR-142
• AKT2

目的:研究micro RNA142(miR-142)对角膜新生血管形成的影响及其相关机制。方法:实验设置空白对照组、阴性对照组、过表达miR-142组以及干扰miR-142组,分别利用miR-142模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)过表达和干扰miR-142;CCK-8增殖实验检测miR-142对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖能力的影响;双荧光素酶报告基因验证AKT2是否为miR-142的直接靶基因;RT-PCR和Western blot实验检测miR-142对AKT2表达水平的影响。结果:CCK-8增殖实验结果显示空白对照组、阴性对照组和过表达miR-142组96 h的吸光度(absorbance,A)均值分别为872.21±44.20、842.16±49.54和1 407.91±16.58,差异具有统计学意义(F=102.8,P=0.000)。干扰miR-142后HUVECs增殖能力明显减弱(空白对照组=919.69±25.46,阴性对照组=856.76±36.22,干扰miR-142组=602.77±25.62;F=72.8,P=0.000)。双荧光素酶报告基因结果发现过表达miR-142后AKT2表达水平没有明显变化(对照组=0.36,过表达miR-142组=0.46,P=0.147)。RT-PCR结果显示过表达miR-142(0.408±0.046)后AKT2表达水平较阴性对照组(0.173±0.022)升高(P=0.018),干扰miR-142组(0.16±0.02)较阴性对照组(0.362±0.068)明显降低(P=0.037),差异均具有统计学意义。Western blot实验进一步验证了miR-142对AKT2基因的调控作用。进一步研究发现,sh RNA干扰AKT2后miR-142促进HUVECs增殖的作用消失,对照组、过表达miR-142组、过表达miR-142+sh RNA-AKT2组和sh RNA-AKT2组的96 h吸光度值分别为981.80±75.40、1 357.81±47.56、806.39±49.70和921.59±40.38,差异具有统计学意义(F=40.97,P=0.000)。结论:miR-142通过上调AKT2的表达促进HUVECs增殖,从而促进角膜新生血管形成。

• 单位
  成都市第六人民医院; 重庆市妇幼保健院; 重庆医科大学; 重庆医科大学附属第一医院