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摘要
目的 探究柚皮苷(naringin,Nar)在脂多糖(LPS)诱导的肝损伤中的作用及相关作用机制。方法 60只C47BL/6野生型雄性小鼠随机分为4组(每组15只)：对照组(Control)，柚皮苷组(Nar)，脂多糖模型组(lipopolysaccharide,LPS)与柚皮苷组处理的LPS模型组(Nar+LPS)，其中Nar组与Nar+LPS组小鼠予以100 mg·kg-1·d-1的柚皮苷持续灌胃10天，而LPS与LPS+Nar组小鼠经腹注射5 mg·kg-1 LPS进行肝损伤造模，6 h后脱颈处死各组小鼠；试剂盒检测各组小鼠外周血中谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspertate aminotransferase,AST)含量，ELISA检测炎症因子白介素-6(interlukin-6,IL-6)、白介素-1β(interlukin-1β,IL-1β)与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平；取小鼠肝脏组织，苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)与脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated nick end labeling,TUNEL)观察各组小鼠肝组织病理改变与细胞焦亡水平，反转录酶-聚合酶链锁反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测肝组织中IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表达，试剂盒检测氧化应激标志物丙二醛(malondialdehyde,MDA)与谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平；体外培养小鼠Kupffer细胞，CCK-8筛选LPS与Nar的最佳作用浓度后，将细胞同样分为Control组、Nar组、LPS组与Nar+LPS组；ELSIA检测各组细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α的表达；试剂盒检测细胞中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、MDA与GSH水平；cleaved Caspase-1/TUNEL染色检测各组细胞的焦亡情况，Western blot检测细胞中焦亡相关蛋白，核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotidebinding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1裂解片段(cleaved-cysteinyl aspartate specific proteinase-1,cleaved Caspase-1)、gasdermin D的N端寡聚化(Gasdermin D N-terminal oligomerization,GSDMD-N)、IL-1β的表达水平和核因子-κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)的磷酸化水平(p-NF-κB/NF-κB)。结果 与Control组相比，LPS组与Nar+LPS组的血清中ALT、AST与IL-6、IL-1β、TNF-α水平均显著增加(P<0.05或P<0.01)，肝组织病理损伤加重，肝细胞焦亡率升高，细胞中IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNAs水平与MDA的含量均显著升高(P<0.05)，而GSH明显降低(P<0.05),Nar组无明显改变(P>0.05)，但较LPS组相比，Nar+LPS组中除肝组织中GSH含量明显升高外，上述其他检测指标均明显降低(P<0.05)；体外细胞实验中筛选出100 ng·mL-1的LPS与200μmol·L-1的Nar为最佳作用浓度；与Control组Kupffer细胞相比，LPS组与LPS+Nar组的IL-6、IL-1β、TNF-α与MDA、LDH含量和细胞焦亡水平及焦亡相关蛋白NLRP3、cleaved Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β的表达均明显升高(P<0.05),NF-κB的磷酸化水平(p-NF-κB/NF-κB)亦显著升高，而GSH含量明显降低(P<0.05)，但与LPS组相比，LPS+Nar组除GSH明显升高外，其他检测指标均显著降低(P<0.05)。结论 柚皮苷可在体内外降低炎症反应与氧化应激来减轻LPS诱导的肝损伤与功能障碍，这可能与其能通过NF-κB途径抑制Kupffer细胞焦亡的机制相关。
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单位河南省中医院; 郑州市中医院
