新疆石河子地区牛支原体的分离鉴定及药物敏感性分析

作者：肖洋洋; 李芮芮; 马忠臣; 唐恬; 王娜; 陈创夫; 郑炜; 王勇^*; 王鹏雁^*

来源：中国畜牧兽医, 2023, 50(02): 754-763.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.02.033

• 牛支原体
• 分离鉴定
• 药物敏感性试验

【目的】确定引起新疆石河子地区集约化牛场常发性肺炎的主要病原同时进行病原的体外药物敏感性分析。【方法】采集有典型咳嗽、流涕症状的牛鼻拭子10份和病死牛肺脏组织1份，用牛支原体特异性引物进行PCR检测，将检测为阳性的样本进行病原培养纯化，对纯化后的分离株菌落进行形态学观察、Dienes染色、生化试验及16S rRNA测序和进化分析，通过测定颜色变化单位(CCU)测定分离株生长曲线，并对分离株进行药物敏感性试验。【结果】PCR结果显示，10份鼻拭子中检测出7份牛支原体阳性样本，1份病死牛肺脏组织也检测为阳性；在涂有肺脏组织研磨液培养液的PPLO固体培养基上长出针尖状的菌落，纯化后分离株菌落形态为典型的煎蛋状；Dienes染色可见明显的深蓝色中心脐；生化试验结果显示，分离株不水解明胶、精氨酸、七叶苷，不发酵乳糖、葡萄糖和甘露醇，不分解尿素，可还原氯化三苯基四氮唑；16S rRNA测序结果显示，分离株与牛支原体国际标准株PG45相似性为99.7%,与国内牛支原体地方流行株XBY01、Ningxia-1、NM2012、Tibet-10的相似性最高，均为99.9%;生长曲线测定结果显示，分离株在培养基中生长6 h后进入对数生长期，54 h时达到高峰进入稳定期，72 h后进入衰亡期；药物敏感性试验结果显示，分离株对呋喃妥因、四环素和多西环素、庆大霉素和卡那霉素敏感，对诺氟沙星和氧氟沙星中介，而对环丙沙星、洛美沙星及阿奇霉素和红霉素耐药。【结论】本研究成功从肺脏组织中分离鉴定出1株牛支原体，培养54 h是该分离株的最佳收获时间，与国内大多数牛支原体地方流行株差异较小，整体遗传进化相对稳定，有一定的耐药性，本研究结果可为当地对牛支原体的防控提供参考，也为牛支原体致病机制研究及疫苗研发奠定基础。

• 单位
  动物科技学院; 石河子大学