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摘要
循环肿瘤细胞团（Circulating tumor cell cluster, CTC cluster）的单细胞分析对CTC cluster的生物学效应分析极其重要。为了使CTC cluster单细胞分析可以获得最有效的结果，分析前的捕获和单细胞分离的过程必须能够保持CTC cluster的完整性和细胞内部RNA的完整。本研究通过单细胞RNA测序中的逆转录方法逆转录并定量3个看家基因进行RNA质控，同时测量CTC cluster的横向直径用于评估CTC cluster的完整性，从而测定CTC cluster捕获和单细胞分离过程对CTC cluster单细胞分析结果的影响。分别采用胰酶-EDTA和非酶细胞解离溶液（Non-enzymatic cell dissociation solution, NECDS）分离CTC cluster中的单细胞，并考察了单细胞分离过程对胞内RNA的影响。考察了负向富集、正向富集和膜过滤捕获方案中不同操作流程对CTC cluster完整性和单细胞内RNA完整性的影响。结果表明，NECDS可快速分离CTC cluster中的单细胞且不会对细胞内RNA产生影响。捕获CTC cluster时，发现旋转孵育以及红细胞裂解处理都会破坏CTC cluster的完整性。因此，含有类似操作步骤的捕获方案均不适合CTC cluster，而操作流程精简的正向捕获方案具有最好的CTC cluster捕获效果，并且不会影响胞内RNA的质量。因此，CTC cluster的单细胞RNA研究需要温和的捕获和单细胞分离方案。本研究为CTC cluster单细胞分析提供了有效的样品制备策略。
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