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摘要
目的 探讨黄芪甲苷对大鼠肾缺血再灌注损伤的免疫保护作用机制。方法 将大鼠按随机数字表分为正常对照组、假手术组、模型组、黄芪甲苷组,每组6只。黄芪甲苷组大鼠腹腔注射黄芪甲苷100 mg/kg,其余各组大鼠腹腔注射等体积生理盐水,给药30 min后,模型组、黄芪甲苷组制备肾缺血再灌注损伤模型。造模后24 h处死大鼠,测定血尿肌酐、尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)、肾脏损伤分子-1(kidney injury molecule 1, KIM-1)水平；采用ELISA法检测血清Th1型细胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-2)和Th2型细胞因子(IL-4、IL-5、IL-10)水平。采用Western blot法及PCR法检测肾组织中TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10蛋白及基因水平,采用HE染色观察各组大鼠肾脏病理学改变,采用TUNEL染色观察各组大鼠肾组织凋亡情况,采用免疫组化法检测肾组织CD20蛋白的表达。结果 与模型组比较,黄芪甲苷组SCr[(58.74±9.44)μmol/L比(85.03±23.48)μmol/L]降低(P<0.05),肌酐清除率[(0.81±0.13)ml/min比(0.37±0.08)ml/min]升高(P<0.05),尿NGAL[(579.34±11.70) pg/ml比(827.60±14.48)pg/ml]、KIM-1[(105.06±2.10)pg/ml比(151.67±3.06)pg/ml]水平下降(P<0.05)；肾小管上皮细胞凋亡率[(14.36±1.36)%比(28.63±2.03)%]降低(P<0.05)；血清TNF-α[(361.44±9.66) pg/ml比(515.93±10.61)pg/ml]、IFN-γ[(64.11±1.21)pg/ml比(93.51±2.15)pg/ml]、IL-2[(388.33±1.21)pg/ml比(557.82±15.29)pg/ml]、IL-4[(60.89±1.21)pg/ml比(95.56±2.75)pg/ml]、IL-5[(94.02±2.81)pg/ml比(147.07±3.50)pg/ml]、IL-10[(52.62±2.51)pg/ml比(78.22±3.24)pg/ml]水平降低(P<0.01)；肾组织TNF-α mRNA[(1.89±0.59)比(2.87±0.97)]、IFN-γ mRNA[(3.11±1.02)比(5.98±1.52)]、IL-2 mRNA[(1.68±0.44)比(4.09±1.65)]、IL-4 mRNA[(2.41±0.81)比(4.69±1.62)]、IL-5 mRNA[(1.56±0.19)比(2.92±0.55)]、IL-10 mRNA[(1.45±0.14)比(2.85±0.32)]表达降低(P<0.01)。黄芪甲苷组IL-4/IFN-γ比值基本恢复至假手术组水平(P<0.01)；肾组织CD20细胞表达降低(P<0.05)。结论 Th1细胞、B淋巴细胞在肾缺血再灌注损伤中发挥损伤作用,而Th2细胞发挥保护作用。黄芪甲苷在急性肾损伤发生后早期可调节Th1/Th2的失衡,减轻肾小管损伤,发挥肾脏保护作用。
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