iTRAQ结合高通量液相色谱-串联质谱技术分析贝沙罗汀抗脑缺血再灌注损伤的作用研究

作者：刘洁; 刘胜伟; 任忠洋; 丁玲; 夏春勇^*

来源：中国临床药理学杂志, 2023, 39(22): 3306-3310.

DOI：10.13699/j.cnki.1001-6821.2023.22.024

• 贝沙罗汀
• 脑缺血再灌注损伤
• 蛋白质组学

目的 联合应用高通量液相色谱-串联质谱的蛋白质定量分析技术和同位素标记的相对及绝对定量技术(iTRAQ)技术，分析贝沙罗汀抗脑缺血/再灌注损伤(CIRI)的作用并对关键通路中的关键靶点进行验证。方法 随机将39只小鼠分组：13只假手术组，13只模型组，13只实验组。实验组和模型组小鼠建立CIRI模型。实验组小鼠给予贝沙罗汀5 mg·kg-1·d-1,腹腔注射，模型组则腹腔注射等量溶剂，造模后72 h,获取检测标本。各组取3只，联合应用高通量液相色谱-串联质谱的蛋白质定量分析技术和iTRAQ技术，用Proteinpilot软件筛选差异表达的蛋白质，取“模型组vs实验组”与“模型组vs假手术组”的交集差异蛋白，即为贝沙罗汀作用于CIRI的潜在靶点，在STRING 11.5平台上，构建靶点交联互作网络，用Cytoscape 3.8.2软件制图，利用R语言，对贝沙罗汀抗CIRI的潜在靶点进行GO富集分析及KEGG富集通路分析，预测潜在机制。各组取10只，用蛋白质印迹法验证贝沙罗汀抗脑缺血/再灌注损伤的潜在靶点。结果 筛选出贝沙罗汀抗CIRI的潜在靶点214个，通过PPI网络分析，获取度值排名前十的关键靶蛋白有Hspa8、Alb、Dlg4、Hsp90aa1、Hsp90ab1等。GO结果显示，细胞成分主要涉及髓磷脂、神经元间的突触等，分子功能主要有肌动蛋白丝绑定、伴侣蛋白绑定等，参与突触的组织、蛋白交联等生物学过程。通过KEGG显示，潜在作用通路有Nod样受体信号通路、坏死性凋亡通路、脂质和动脉粥样硬化通路等。结论 贝沙罗汀干预CIRI小鼠后脑组织蛋白质存在明显的差异性表达，通过生物信息学分析，涉及多靶点、多通路，为进一步探索、筛选贝沙罗汀作用于CIRI治疗新靶点提供了重要参考。

• 单位
  重庆大学; 重庆医科大学附属永川医院