Bax、Bad基因真核表达质粒构建及转染人胚肾细胞后的翻译水平观察

作者：王孜恒; 周敬伟; 侯筱宇^*

来源：山东医药, 2019, 59(30): 21-24.

• Bcl-2相关X蛋白
• Bcl-2相关细胞死亡因子
• 真核表达质粒
• 人胚肾细胞

目的构建Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2相关细胞死亡因子(Bad)基因真核表达质粒pcDNA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad,并观察两质粒转染至人胚肾293(HEK293)细胞后Bax、Bad的表达。方法采用TRIzol试剂提取大鼠脑组织总RNA,利用反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)扩增Bax和Bad的互补DNA(cDNA)序列,将cDNA分别克隆至pcDNA3.1载体上。采用脂质体转染法将序列正确的pcDNA3.1-Bax和pcDNA3.1-Bad真核表达质粒分别转染至HEK293细胞,免疫印迹法鉴定Bax、Bad在细胞中的表达。结果双酶切和DNA测序分析显示Bax和Bad基因片段成功插入pcDNA3.1载体中,并且与其cDNA(Genbank:NM017059.2和AF031227.1)序列完全一致。免疫印迹显示pcDNA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad真核表达质粒能够在HEK293细胞中高效表达。结论 pcDNA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad真核表达质粒构建成功,Bax、Bad在HEK293细胞中成功过表达。

• 单位
  徐州医科大学