副溶血性弧菌外膜蛋白BamA重组表达及其免疫原性分析

作者：刘建欣; 刘蕾; 郭珊珊; 袁倩云; 王文彬^*

来源：江苏农业科学, 2022, 50(15): 43-50.

DOI：10.15889/j.issn.1002-1302.2022.15.006

• 副溶血性弧菌
• 外膜蛋白BamA
• 重组表达
• 免疫原性
• ELISA
• 免疫印迹

副溶血性弧菌外膜蛋白BamA是β-桶组装BAM复合物的核心成分，参与细胞外膜蛋白运送和安装过程，是潜在的新型靶标抗原，目前其在免疫检测抗原和疫苗中的潜在价值尚未有研究报道。本研究通过生物信息学软件SnapGene和Protean分析BamA的序列并筛选出多肽，采用PCR扩增出外膜蛋白BamA的基因片段，构建重组质粒pET-28a(+)-BamA;经大肠杆菌BL21诱导表达BamA重组蛋白(90 ku);多肽与BSA偶联，制备的抗原免疫BALB/c小鼠制备了血清。采用酶联免疫分析(ELISA)和蛋白质印迹法(Western blot)测定BamA蛋白及多肽免疫血清对24株弧菌的交叉反应。ELISA测定结果表明，免疫血清对BamA蛋白的效价在121 K以上，对副溶血性弧菌等弧菌的效价较弱(0.5 K);免疫印迹结果显示，BamA蛋白血清与副溶血性弧菌CICC 21617、CICC 21618、杀岩龙虾弧菌和非O1型霍乱弧菌等弧菌属细胞裂解物中90 ku左右的蛋白可发生特异性反应，而对费氏另类弧菌、嗜水气单胞菌和迟缓爱德华氏菌等非弧菌属无交叉反应。弧菌外膜蛋白BamA具有弧菌属保守性并可以诱导产生弧菌特异性抗体，多肽在菌体表面的暴露性可能受到其他抗原的影响，这给后续弧菌诊断抗原和疫苗抗原研究提供了依据。

• 单位
  江苏省海洋生物技术重点实验室