骨髓间充质干细胞外泌体对骨肉瘤MG63细胞增殖与迁移的影响

作者：齐进^*; 张芮浩

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(10): 1952-1955.

• 骨髓
• 间充质干细胞
• 外泌体
• 骨肉瘤
• 增殖
• 迁移

目的探讨人骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体对骨肉瘤细胞MG63增殖与迁移的影响。方法采用贴壁培养法分离人BMSCs, 流式细胞技术对BMSCs鉴定。采用超速离心法分离BMSCs外泌体, 透射电镜观察外泌体形态、蛋白质印迹法(Western blot)检测外泌体特异性分子标志物CD81、CD63。将体外培养的MG63细胞分为BMSCs外泌体实验组和对照组。采用细胞计数法、细胞增殖实验(CCK-8)和细胞划痕实验检测细胞的增殖和迁移, 采用聚合酶链反应(PCR)及Western blot技术检测外泌体干预后B淋巴细胞瘤-2蛋白(bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bax)表达。两组间比较采用t检验, 多组间比较采用单因素方差分析。结果透射电镜观察到外泌体超微结构, Western blot检测到外泌体表面标志物CD81、CD63。BMSCs外泌体被骨肉瘤MG63细胞摄取24 h后, 实验组与对照组MG63细胞分别为(4.469±0.132)×106个和(2.445±0.673)×106个, 差异有统计学意义(t=5.110, P<0.05)。浓度为200、400、600、800 μg/ml BMSCs外泌体组细胞的吸光度(A)值分别为1.380±0.093、1.770±0.206、1.865±0.090和1.878±0.182, 与空白对照组(0.994±0.084)比较, 差异均有统计学意义(F=22.272, P<0.05)。细胞划痕实验表明实验组24、48 h后MG63迁移面积分别达(75.114±5.981)%和(94.720±3.024)%, 与对照组比较[(56.324±7.834)%和(68.217±2.204)%], 差异均有统计学意义(t=3.302、12.267, P<0.05)。流式细胞术发现实验组MG63细胞凋亡显著低于空白对照组, 差异有统计学意义(t=26.210, P<0.01)。与对照组比较, BMSCs外泌体可上调MG63细胞bcl-2表达, bax的表达水平下调, 差异有统计学意义(t=6.550、-5.591, P<0.05)。Western blot结果显示, BMSCs外泌体可上调MG63细胞bcl-2的表达, 而bax的表达水平下调, 差异有统计学意义(t=3.178、-4.457, P<0.05)。结论人BMSCs源性外泌体对骨肉瘤细胞MG63具有促进其增殖与迁移作用。

• 单位
  兰州大学第二医院