健脾补肾方对辐射损伤模型小鼠脾脏自噬小体及PI3K/Akt/mTOR通路的影响

作者：肖静静; 何东初^*; 张梦云; 张勇; 丁晓娟; 伍伟; 杨文超

来源：中医杂志, 2023, 64(24): 2553-2560.

DOI：10.13288/j.11-2166/r.2023.24.012

• 辐射损伤
• 健脾补肾方
• 自噬
• 磷脂酰肌醇3-激酶
• 蛋白激酶B
• 雷帕霉素靶蛋白

目的 探讨健脾补肾方对辐射所致免疫功能损伤的影响和可能作用机制。方法 50只昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、胸腺肽组和健脾补肾方大、小剂量组，每组10只。除正常组外其余各组小鼠采用6.0 Gy X线一次性全身照射建立辐射损伤小鼠模型。造模成功后健脾补肾方小、大剂量组小鼠分别给予13 g/（kg·d）、26 g/（kg·d）健脾补肾方灌胃，胸腺肽组小鼠给予胸腺肽肠溶片11.7 mg/（kg·d）灌胃，正常组、模型组小鼠用0.9%氯化钠溶液0.1 ml/（10 g·d）灌胃。各组均每日灌胃1次，连续7天。最后一次灌胃后，小鼠称重，处死后分离小鼠脾脏，称重并计算脾脏指数；ELISA法检测脾脏组织干扰素γ (IFN-γ)、白细胞介素2 (IL-2)含量；透射电镜观察脾脏自噬小体；实时荧光定量PCR检测脾脏磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B (Akt)、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）mRNA表达水平；Western blot法检测并计算脾脏PI3K、Akt、mTOR蛋白表达及自噬相关蛋白微管相关轻链蛋白3 (LC3)、Beclin1、p62蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠体质量、脾脏指数均显著下降（P<0.01），脾脏IFN-γ、IL-2含量显著降低（P<0.01），脾脏PI3K、Akt、mTOR mRNA及蛋白表达水平均显著下降（P<0.01）,Beclin1蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值显著升高（P<0.01）,p62蛋白表达水平显著下降（P<0.01），透射电镜显示脾脏自噬小体数量明显增多，细胞结构损伤程度重。与模型组比较，各药物干预组小鼠上述各指标均显著改善（P<0.05或P<0.01），健脾补肾方大剂量组小鼠脾脏线粒体可见部分完整脊，自噬体较多；健脾补肾方小剂量组、胸腺肽组小鼠脾脏线粒体结构较完整，自噬体较少。健脾补肾方小剂量组各指标改善效果优于健脾补肾方大剂量组（P<0.05或P<0.01），且与胸腺肽组各指标差异无统计学意义（P>0.05）。结论 健脾补肾方可能通过增强脾脏PI3K/Akt/mTOR信号通路，抑制辐射诱导的自噬过度活化，从而减轻脾脏结构损伤，促进免疫功能的恢复，并以小剂量效佳。