人类8型疱疹病毒开放读码框73C基因原核表达、纯化及鉴定研究

作者：何方平; 王星; 林仁勇; 卢晓梅; 冯晓辉; 张亚楼; 张跃新; 何斌; 温浩

来源：中华传染病杂志, 2006, (06): 382-384.

• 疱疹病毒8型，人
• 开放阅读框架
• 基因表达

目的构建人类8型疱疹病毒（HHV-8）基因开放读码框（ORF）73C重组原核表达质粒并诱导表达,获得HHV-8潜伏态相关核抗原重组蛋白,并对其免疫活性进行初步鉴定。方法软件设计引物,分别在引物两端添加特异的酶切位点,以pGEM-Teasy/ORF73质粒为模板,聚合酶链反应（PCR）扩增ORF73C基因序列,克隆入原核表达载体pET-28a（+）,构建原核表达质粒pET28a- ORF73C；转化E．coli DH5α,经酶切、测序鉴定其插入序列的正确性,转入E．coli BL21（DE3）,并诱导表达,以多聚组氨酸亲合层析柱纯化,凝胶蛋白电泳、Western印迹方法行表达蛋白的分析和抗原特异性免疫鉴定。结果测序结果表明构建的pET28a-ORF73C原核表达质粒连接正确,插入的ORF73C基因片段为453 bp。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）表明ORF73C基因成功表达,在相对分子质量20000处有表达条带；Western印迹分析显示重组蛋白能被卡波济肉瘤患者阳性血清识别,具有良好的抗原性。结论成功构建了pET28a-ORF73C原核表达质粒,获得的纯化HHV-8潜伏态相关核抗原蛋白与卡波济肉瘤患者血清具有特异性识别,显示其作为检测抗原的可能,但其敏感性和特异性则有待进一步的验证。

• 单位
  芝加哥大学; 新疆医科大学第一附属医院