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摘要
目的建立分离提取呼吸道纤毛的方法,为进一步研究纤毛蛋白磷酸化在纤毛运动调控机制中的作用提供方法学基础。方法用Triton X-100分离缓冲液孵育兔气管黏膜上皮,使纤毛上皮细胞的纤毛与细胞体分离,通过离心提取分离的纤毛,将提取的标本行透射电镜观察、Western blotting小鼠检测β微管蛋白(β-tubulin)和纤毛蛋白磷酸化情况。结果透射电镜观察可见提取的标本为浓集的纤毛,纤毛的横断面可见典型的"9+2"结构;②Western blotting检测可见高信号强度的β-tubulin条带;③Western blotting检测可见5条酪氨酸磷酸化的蛋白条带。结论经含有Triton X-100的缓冲液孵育的兔气管黏膜上皮离心后可提取到分离的纤毛标本,适于进行进一步的纤毛蛋白磷酸化研究。
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单位北京市耳鼻咽喉科研究所; 首都医科大学附属北京同仁医院
