弓形虫SAG2基因在毕赤酵母中的表达及免疫原性研究

作者：王芳; 吴少庭; 黄汉菊; 李俊华; 付小强; 甘燕; 雷蕾

来源：中国病原生物学杂志, 2008, (05): 370-373.

• 弓形虫
• SAG2
• 毕赤酵母菌
• 基因表达
• 免疫原性

目的在毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中表达弓形虫SAG2基因,探索一种新的有效活化机体抗弓形虫免疫反应的疫苗。方法以重组质粒pET23a-SAG2为模板,亚克隆目的片段SAG2至酵母菌分泌表达载体pPICZαA,重组质粒经线性化后电转化转染至毕赤酵母菌GS115菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子。经甲醇诱导表达,取细胞裂解上清进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)分析。以整体重组酵母菌作为疫苗腹腔免疫BALB/c小鼠,检测小鼠的免疫反应。结果成功构建了pPICZαA-SAG2毕赤酵母表达重组质粒。经甲醇诱导,在酵母细胞内表达分子质量单位为22 ku的蛋白。Western blot显示,22 ku蛋白可被抗-His标签抗体识别。结论在毕赤酵母菌中成功表达了SAG2基因。整体重组酵母活菌具有免疫原性。

• 单位
  深圳市疾病预防控制中心; 华中科技大学同济医学院