木薯MeWRKY12基因的CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建及验证

作者：郭文雅; 王海; 王亚杰; 张彤; 姚远; 郭建春; 耿梦婷; 陈银华

来源：分子植物育种, 2021, 1-12.

• CRISPR/Cas9
• 木薯
• MeWRKY12基因

植物WRKY转录因子可参与植物对重金属离子的胁迫响应过程，木薯MeWRKY12基因表达受到镉(Cd)、铅(Pb)离子胁迫诱导。本研究利用在线软件CRISPR-P v2.0设计了MeWRKY12基因的编辑靶点，构建CRISPR/Cas9基因编辑载体pCAMBIA1301-Cas9-MeWRKY12-sgRNA，并将该载体转化、侵染木薯脆性胚性愈伤组织。PCR扩增基因靶点及潜在的脱靶位点区域序列，并进行Sanger测序分析序列变化情况。结果表明，MeWRKY12基因被成功编辑，且没有脱靶现象。本研究有助于进一步获得MeWRKY12基因突变体，为解析MeWRKY12转录因子调控木薯响应Cd、Pb胁迫的分子机理打下基础。

• 单位
  海南大学; 中国热带农业科学院热带生物技术研究所; 海南恩红农业科技有限公司