具核梭杆菌外膜FomA蛋白的获得及其免疫原性研究

作者：马丽^*; 冯希平; 武俏丽; 张向宇; 张旭

来源：中华口腔医学杂志, 2018, 53(10): 674-680.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1002-0098.2018.10.006

• 梭杆菌,具核
• 牙周脓肿
• FomA蛋白
• 免疫原性

目的检测具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)的主要外膜孔道FomA蛋白的免疫原性、免疫水平以及对牙龈组织的免疫效果,为研究以FomA蛋白为靶点预防及治疗牙周感染的可行性提供理论依据。方法应用基因重组技术,使用大肠杆菌表达系统表达并获取纯化的FomA蛋白,将50μg该蛋白或50 ml磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS)通过皮下注射方式免疫C57小鼠(随机数字法分组,每组各10只),在小鼠血清中检测FomA特异性抗体表达情况,比较组间差异,评估FomA蛋白的免疫原性。再将上述小鼠分成FomA Fn组、FomA Fn+牙龈卟啉单胞菌(Porphromonas gingivalis, Pg)组、PBS Fn组、PBS Fn+Pg组,分别使用Fn菌悬液或Fn与Pg混合菌悬液制备牙周脓肿模型(PBS为相应FomA组的对照组),对小鼠牙龈脓肿评分,酶联免疫吸附测定法测定小鼠血清和牙龈组织中白介素(interleukin, IL) 1β的浓度,比较上述指标的组间差异,评价FomA蛋白的免疫效果。结果通过基因重组技术成功获取1.0～1.5g FomA蛋白,将该蛋白皮下注射免疫小鼠后,小鼠血清中均可检测到FomA特异性抗体,该抗体效价在二次免疫后2周达峰值。利用牙周致病菌Fn及Fn+Pg成功构建小鼠下颌牙龈脓肿模型,FomA Fn组小鼠牙龈脓肿评分[(1.82±0.35)分]显著低于PBS Fn组[(2.62±0.71)分](P=0.049);FomA Fn+Pg组小鼠牙龈脓肿评分[(2.31±0.55)分]亦显著低于PBS Fn+Pg组[(3.63±0.45)分](P=0.003);FomA Fn+Pg组与FomA Fn组小鼠血清及牙龈组织中IL-1β浓度均分别显著低于PBS对照组(P<0.001)。结论使用大肠杆菌表达系统能成功表达并获得一定量的Fn外膜FomA蛋白,该重组蛋白具有一定的免疫原性,通过对小鼠皮下注射的方式可使小鼠血清中产生一定水平的抗体,有助于机体降低牙周致病菌Fn及Pg引起的牙周感染程度。

• 单位
  天津医科大学口腔医院; 上海市口腔医学研究所; 天津市神经外科研究所; 上海交通大学医学院附属第九人民医院