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摘要
目的:建立基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)的蕲蛇快速检测方法，实现中药蕲蛇的可视化快速鉴定。方法:依据《中华人民共和国药典》收录的蕲蛇特异性序列设计4条LAMP引物(2条内引物、2条外引物),建立蕲蛇LAMP的鉴别方法，对比《中华人民共和国药典》收录的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)方法的检测结果，评价LAMP的鉴别方法的特异性和灵敏度，并采用LAMP鉴别方法和PCR方法鉴别市售蕲蛇的真伪。结果:使用该引物建立的蕲蛇LAMP鉴别方法对蕲蛇对照药材和4份市售蕲蛇样本产生扩增，对1份市售蕲蛇样本和8种蕲蛇混淆品样本无扩增，与PCR鉴别结果一致，说明蕲蛇的LAMP鉴别方法具有良好的特异性。LAMP检测的灵敏度在DNA水平上达到0.004 ng·μL-1,PCR检测的灵敏度为0.4 ng·μL-1,因而LAMP检测具有较高的灵敏度。结论:本研究建立的LAMP检测方法可以应用于中药材蕲蛇真伪的快速鉴别。
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