3TAT-DRBD融合蛋白的原核表达及其siRNA结合活性与穿膜功能的鉴定

作者：刁艳君; 刘家云; 马越云; 苏明权; 郝晓柯

来源：中国肿瘤生物治疗杂志, 2013, (02): 201-206.

• TAT
• DRBD
• 融合蛋白
• siRNA
• 前列腺癌
• 结合活性
• 穿膜功能 TAT
• DRBD
• fusion protein
• siRNA
• prostate cancer
• binding activity
• membrane-penetrating function

目的:构建3TAT-DRBD重组载体,表达和纯化融合蛋白,并对其siRNA结合活性和穿膜功能进行初步验证。方法:采用基因合成技术获取靶基因3TAT-DRBD,并克隆到原核表达载体pET-44b中;用IPTG诱导融合蛋白表达,镍亲和凝胶层析柱纯化融合蛋白,凝血酶切除标签,Western blotting鉴定。凝胶迁移阻滞实验验证DRBD和siRNA的结合能力,激光共聚焦显微镜观察TAT的穿膜能力。结果:限制性酶切和基因测序表明重组质粒pET-44b-3TAT-DRBD构建成功;IPTG诱导后3TAT-DRBD融合蛋白(含Nus标签和S标签)在大肠杆菌中高效表达,可溶性蛋白占菌体总蛋白约80%;成...

• 单位
  第四军医大学; 西京医院