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摘要
昆虫蜕皮激素氧化酶(EO)是分解蜕皮激素的关键酶之一，该酶通过蜕皮激素3位异构化途径将蜕皮激素分解成3异构化蜕皮激素，从而调控蜕皮激素的滴度。课题组前期通过家蚕转录组学分析发现一个在丝腺组织特异表达的蜕皮激素氧化酶基因(EOs),为了研究该基因的时空表达模式及蛋白质功能，对丝腺蜕皮激素氧化酶基因的表达谱进行了分析，同时利用原核表达系统对其进行重组表达及分离纯化。RT-PCR和qRT-PCR检测表明，EOs在家蚕幼虫5龄期的丝腺组织特异表达，且主要在中部丝腺的前部表达；免疫荧光实验结果表明，EO不仅存在于家蚕中部丝腺细胞，而且还会分泌到丝腺腺腔中。将EOs全长cDNA克隆到pMD-19T载体中，再进一步亚克隆到原核表达载体PET-28a,然后将构建好的pET28-BmEOs质粒转入大肠埃希菌BL21中进行表达，通过SDS-PAGE检测发现在1 mmol/L IPTG诱导后的上清中有一条大小约60 kD的蛋白质条带，经Western blot检测该蛋白质可与抗体发生特异性结合，表明BmEOs被成功表达。将大量上清经过Ni亲和柱纯化后，获得了纯化的目的蛋白质。研究结果为进一步分析丝腺中蜕皮激素氧化酶基因及蛋白质的功能奠定了基础。
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