农杆菌介导的eGFP基因转化瓜叶菊技术体系的建立

作者：张丽; 郭佩瑶; 张春华; 王美军; 邓斯颖; 陈己任; 于晓英^*

来源：分子植物育种, 2020, 18(19): 6350-6358.

DOI：10.13271/j.mpb.018.006350

• 农杆菌
• eGFP基因
• 遗传转化
• 瓜叶菊

为了建立稳定、高效的瓜叶菊遗传转化体系,本试验以瓜叶菊无菌苗茎段作为外植体,采用农杆菌EHA105介导法转化eGFP基因。探讨了不同菌液浓度,共培养时间,硫酸卡那霉素(Kan)和特美汀(Tim)浓度,乙酰丁香酮(AS)和表面活性剂Silwet L-77浓度,以及浸泡时间、超声波和真空渗入处理对外植体生长与转化率的影响。结果表明:在瓜叶菊叶片中成功检测到eGFP基因的瞬时表达,农杆菌菌液OD600为1.0,共培养3 d时最有利于农杆菌与外植体的融合生长;40 mg/L Kan和200 mg/L Tim可以分别作为有效的外植体筛选压和抑菌浓度;100μmol/L AS和0.03%Silwet L-77能有效地诱导愈伤组织和提高转化率;浸泡30 min、超声波60 s和真空渗入30 s都能促进愈伤组织的形成及提高转化率。

• 单位
  长沙民政职业技术学院; 湖南农业大学