基于Gateway~(TM)系统Dec1慢病毒表达载体的构建

作者：李晓明; 林伟; 章翔; 王江; 张璟; **; 韩腾龙; 药立波

来源：中华神经外科疾病研究杂志, 2013, (02): 126-129.

• 分化型胚胎软骨发育基因1
• GatewayTM系统
• 慢病毒表达载体
• 神经胶质瘤 Dec1
• GatewayTM technology
• Lentiviral expression vector
• Glioma

目的利用GatewayTM技术构建分化型胚胎软骨发育基因1(Dec1)的慢病毒表达载体并建立稳定表达该目的基因的人胶质瘤U87细胞株。方法从人脑胶质瘤组织中提取总RNA,经反转录得到目的 cDNA。设计含有特异性酶切位点的引物,通过逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR),获得用于重组的Dec1目的基因全长。将目的片段克隆至入门载体(pENTRTM3C)中产生入门克隆。利用GatewayTM技术,将入门克隆中的目的片段转接于目的载体(pLenti6.3/V5-DEST)中产生表达克隆pLenti6.3-Dec1。在293T细胞中包装慢病毒表达载体pLenti6.3-Dec1并转染U87细胞,通过...

• 单位
  西京医院; 第四军医大学