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摘要
酒精性肝病（alcoholic liver disease, ALD）,随着其发病率和病死率的不断上升，已严重且广泛地影响着全世界人民的健康。甲基阿魏酸（methyl ferulic acid, MFA）在前期已被证实可通过腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase, AMPK）信号显著抑制乙醇诱导的L02细胞内脂质生成，但深层作用机制尚不清楚。该研究旨在现有基础上，进一步阐明MFA可通过microRNA-378b（miR-378b）介导钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶2（calcium/calmodulin-dependent protein kinase kinase 2,CaMKK2）-AMPK信号通路改善乙醇诱导的L02细胞脂质积累的机制。通过100 mmol·L-1乙醇诱导L02细胞48 h建立体外ALD模型，并给予不同浓度(100、50、25μmol·L-1)的MFA处理。采用电穿孔法将miR-378b质粒（含过表达质粒-miR-378b mimics、沉默质粒-miR-378b inhibitor及各自的阴性对照-miR-378b NCs）转染进L02肝细胞以上调或下调细胞中miR-378b水平。采用市售诊断试剂盒和全自动生化分析仪检测细胞中胆固醇（total cholesterol, TC）、甘油三酯（triglyceride, TG）水平。采用定量实时聚合酶链反应（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction, qRT-PCR）检测L02细胞中miR-378b的表达水平，采用PCR检测CaMKK2 mRNA水平，采用Western blot检测脂质代谢过程中参与脂质合成、分解和转运的相关因子的蛋白表达。结果显示乙醇能显著诱导细胞内TG、TC水平的上升，而MFA则能显著降低TG、TC水平。乙醇使miR-378b的水平急剧上调，而MFA有效地抑制了miR-378b水平。miR-378b过表达刺激了乙醇诱导的L02细胞中的脂质积累，miR-378b沉默改善了乙醇诱导的脂质沉积，而MFA通过降低miR-378b来激活CaMKK2-AMPK信号通路，调节脂质合成、分解与转运，从而改善L02细胞内脂代谢紊乱。实验结果表明，MFA通过miR-378b调控CaMKK2-AMPK通路改善L02细胞内脂质沉积。
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单位基础医学院; 桂林医学院
