微量随机尿液中多种氨基酸和有机酸定量方法及其在维生素B12营养状况及相关代谢的初步应用

作者：宋美燕; 黄小兰; 王芳; 张敏^*; 米腊腊; 刘志贞^*

来源：中国医学科学院学报, 2022, 44(06): 941-949.

• 液相色谱-串联质谱
• 随机尿液
• 氨基酸
• 有机酸
• 维生素B12

目的 建立一种高效液相色谱-串联质谱同时定量微量随机尿液中多种氨基酸和有机酸的方法。方法 10μl随机尿液样本经乙腈沉淀蛋白后使用饱和的盐酸正丁醇进行衍生化，衍生后的样本经ACE Excel 2 AQ(50×2.1 mm, 2μm)色谱柱分离，采用电喷雾离子源，在正离子扫描和多反应监测模式下检测。参照现有指南，从灵敏度、特异性、准确度、精密度、回收率、基质效应、稳定性等方面完成系统方法学确证。并检测70例健康儿童、27例维生素B12可疑缺乏儿童及3例甲基丙二酸血症cblC型患儿尿液中的19种目标待测物。结果 19种目标待测物定量下限为0.01～1.00μmol/L,标准曲线线性良好，R2均>0.990。准确度良好(相对误差均<±15%),日内、日间精密度均<15%。分析时间为8 min,除精氨酸外，其余待测物未见明显基质效应，加标回收率为80.20%～114.97%,室温8 h和3个冻融循环稳定性良好。健康儿童尿液中目标待测物测定值在Labcorp实验室公布的儿童参考区间内，维生素B12可疑缺乏儿童尿液中甲基丙二酸(P=0.030)和同型半胱氨酸(P<0.001)水平显著高于健康儿童，甲基丙二酸血症cblC型患儿尿液中甲基丙二酸、甲基枸橼酸和同型半胱氨酸水平高于健康儿童中位数水平5.14～76.52倍。结论 本研究建立的液相色谱-串联质谱同时定量微量随机尿液中多种氨基酸和有机酸的方法样本需求量小，分析时间短，可准确反映儿童尿液中目标待测物水平，可为维生素B12缺乏儿童尿液氨基酸及其代谢产物代谢特征研究提供数据支持。

• 单位
  山西医科大学; 首都儿科研究所; 基础医学院