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摘要
目的构建MexA原核表达载体,并实现MexA原核表达、纯化。方法从多重耐药的铜绿假单胞菌抽提DNA,经PCR扩增出mexA1基因与PUC18克隆载体连接,PCR、酶切及测序鉴定,再经PCR扩增出mexA基因,酶切纯化后克隆到原核表达载体PQE30,构建重组表达载体PQE30/mexA,PCR及酶切鉴定,IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot检测有无蛋白的表达。结果已获得长约1.5kb PCR产物,酶切结果显示所构建的重组质粒已成功地克隆了mexA基因,序列分析结果与PA01mexA序列相同。SDS-PAGE检测表达产物,在相对分子量40kDa处有表达条带,诱导表达之菌体,超声破碎后,目的蛋白主要以包涵体形式存在。结论获得mexA基因,并在E.coliM15中成功表达。融合蛋白纯化后作免疫原,为制备多克隆抗体打下基础。
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单位江西省南丰县人民医院; 南昌大学第一附属医院; 中国人民解放军总医院
