应用生物素标记与蛋白质组学方法分离鉴定弓形虫表面蛋白和分泌蛋白

作者：刘媛; 薛峰; 黄敏君; 甘绍伯; 谷俊朝

来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2013, (01): 6-11.

• 刚地弓形虫
• 表面蛋白
• 分泌蛋白
• 生物素标记
• 液相色谱和两级质谱联用技术 Toxoplasma gondii
• Surface protein
• Secreted protein
• Biotin labeling
• Liquid chromatographymass spectrometry/mass spectrometry(LC-MS/MS)

目的分离和鉴定刚地弓形虫RH株速殖子表面蛋白和分泌蛋白。方法在绿猴肾Vero细胞株中体外培养弓形虫RH株速殖子,利用滤膜和Percoll细胞分离液分离纯化速殖子。将纯化的速殖子用生物素标记后,裂解虫体,采用亲和素凝胶珠分离生物素标记的弓形虫表面蛋白和分泌蛋白。对分离得到的蛋白进行浓缩和密度梯度凝胶电泳。将电泳条带分段切胶,回收蛋白后,酶切,应用液相色谱和两级质谱联用技术(LC-MS/MS)进行蛋白鉴定。结果共鉴定出785种弓形虫蛋白,其中81种为基因组注释的表面或分泌蛋白,占10.3%。785种蛋白中,检测到同一种蛋白多肽的次数(PSM值)>10的蛋白有65种,其中43种为基因组注释的表面蛋白...

• 单位
  首都医科大学附属北京友谊医院; 北京热带医学研究所