沉默CDKL1基因通过调控PTEN/Akt/mTOR信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭的抑制作用

作者：赵月生; 李祖彬; 刘海鸥; 陶昆麟; 赵齐海; 李娜^*

来源：吉林大学学报(医学版), 2023, 49(05): 1234-1242.

DOI：10.13481/j.1671-587X.20230517

• 乳腺肿瘤
• 周期蛋白依赖性蛋白样激酶1
• 磷酸酶和张力蛋白同源物
• 蛋白激酶
• 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
• 细胞增殖
• 细胞迁移
• 细胞侵袭

目的：探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白样激酶1 (CDKL1)基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和转移的影响，并阐明其可能的作用机制。方法：选择乳腺癌MCF-7细胞作为研究对象，采用小干扰RNA技术(siRNA)沉默CDKL1基因表达。采用1μmol·L-1磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)抑制剂BpV或10μmol·L-1蛋白激酶B (Akt)激动剂SC79进行干预。取对数生长期MCF-7细胞，分为空白对照组(MCF-7细胞不作任何处理)、转染对照(siRNA-NC)组(MCF-7细胞转染siRNA-NC质粒)、 siRNA-CDKL1组(MCF-7细胞转染siRNA-CDKL1质粒)、 siRNA-CDKL1+PTEN抑制剂BpV (siRNA-CDKL1+BpV)组(转染siRNA-CDKL1的MCF-7细胞，再采用1μmol·L-1PTEN抑制剂BpV处理2h)和siRNA-CDKL1+Akt激动剂SC79 (siRNA-CDKL1+SC79)组(转染siRNA CDKL1的MCF-7细胞，再采用10μmol·L-1 Akt激动剂SC79处理2 h)。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和Western blotting法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中CDKL1 mRNA和蛋白表达水平，CCK-8法检测各组乳腺癌MCF-7细胞增殖活性，EdU法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中EdU阳性细胞率，细胞划痕愈合实验检测各组乳腺癌MCF-7细胞划痕愈合率，Transwell小室实验检测各组乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭细胞数，Western blotting法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中基质金属蛋白酶2 (MMP-2)、基质金属蛋白酶9 (MMP-9)、PTEN、Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化Akt (p-Akt)和磷酸化mTOR (p-mTOR)蛋白表达水平。结果：与siRNANC组比较，siRNA-CDKL1组乳腺癌MCF-7细胞中CDKL1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01)，细胞增殖活性降低(P<0.01),EdU阳性细胞率降低(P<0.01)，乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭细胞数降低(P<0.01)，细胞中MMP-2、MMP-9、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平降低(P<0.01),PTEN蛋白表达水平升高(P<0.01)。与siRNA-CDKL1组比较，siRNA-CDKL1+BpV组和siRNACDKL1+SC79组乳腺癌MCF-7细胞增殖活性升高(P<0.01),EdU阳性细胞率升高(P<0.01)，迁移和侵袭细胞数增加(P<0.01)，细胞中MMP-2、MMP-9、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平升高(P<0.01),PTEN蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论：CDKL1基因的沉默可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、侵袭和转移能力，其作用机制可能与调控PTEN/Akt/mTOR信号通路有关。

• 单位
  齐齐哈尔医学院附属第三医院