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摘要
目的：溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种肠道慢性、易复发的非特异性炎症，肠上皮修复障碍是其重要的生物学特点，促进肠上皮愈合达到内镜下黏膜愈合是UC的最终治疗目标。Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)是影响器官发育、组织生长及肿瘤发生的重要辅助转录因子，近年来越来越多的研究关注YAP在肠黏膜修复中的作用，这对于靶向治疗UC及预防相关并发症的发生具有重要意义。本研究探究YAP调控肠黏膜上皮细胞增殖、修复及肠炎相关肿瘤(colitis associated cancer,CAC)发生的分子机制。方法：使用3%葡聚糖硫酸钠盐(dextran sulfate sodium salt,DSS)连续诱导5 d构建小鼠急性肠炎模型。构建YAP过表达(YAPWT)及阴性对照(NC)的慢病毒载体，分别腹腔注射入DSS小鼠体内，于DSS诱导5 d及撤除DSS后正常饮水的5 d(5+5 d)脊椎脱臼处死小鼠，取结肠测量其长度，选择近肛管1～2 cm肠管行免疫组织化学、蛋白质印迹法分析。构建YAP过表达的肠上皮细胞系及信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)小干扰RNA(si-STAT3)，用蛋白质印迹法探究YAP对STAT3的调控方式；用功能学细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)和划痕实验研究YAP调控STAT3在肠上皮细胞增殖中的作用；通过蛋白质免疫共沉淀探究YAP与STAT3的相互作用。结果：DSS炎症诱导导致YAP在肠上皮细胞中表达显著降低，相对于NC小鼠，过表达YAP促进了小鼠在DSS炎症损伤后肠黏膜的修复，表现为肠上皮的结构更为完整，黏膜中炎性细胞的数量减少。蛋白质印迹法、功能学实验及免疫共沉淀结果表明：细胞核中的YAP在DSS撤除后的2 h显著高表达，同时伴随STAT3及磷酸化STAT3(phosphorylated-STAT3,p-STAT3)高表达；YAP过表达上调STAT3、p-STAT3及其转录靶基因细胞-骨髓细胞瘤病毒癌基因(cellularmyelocytomatosis viral oncogene,c-Myc)和G1/S-特异性周期蛋白-D1(cell cycle protein D1,Cyclin D1)的表达，且促进肠上皮细胞的增殖及伤口“愈合”。然而，在过表达YAP的基础上沉默STAT3则c-Myc及Cyclin D1表达降低，细胞增殖能力被逆转。蛋白质免疫共沉淀结果表明YAP和STAT3可以在细胞核内直接结合，促进STAT3的转录表达。在CAC发生过程中，过表达YAP细胞质磷酸化突变体下调STAT3的表达，抑制CAC的发生。结论：YAP通过激活STAT3调控肠上皮细胞增殖，促进DSS急性炎症小鼠的肠黏膜修复，YAP可作为UC肠黏膜修复的重要治疗靶点。然而，长期、过度的YAP激活可导致CAC的发生。
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