食品级高产亮氨酸氨肽酶重组Bacillus subtilis的构建和发酵优化

作者：张大伟; 刘德华; 黄钦钦; 田亚平^*

来源：食品与发酵工业, 2020, 46(08): 1-6.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.023374

• 亮氨酸氨肽酶
• D-丙氨酸消旋酶
• 枯草芽孢杆菌
• 食品级表达
• 发酵优化

为解决枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)在发酵产亮氨酸氨肽酶(leucine aminopeptidase,LAP)需额外添加抗生素的问题,该研究构建了1株食品级产LAP重组B. subtilis。首先通过Cre/lox系统敲除B. subtilis 168基因组中D-丙氨酸消旋酶基因(dal)得到缺陷型菌株BS168 (dal)-。其次使用高斯组装的方法构建以dal作为标记基因的质粒pMA5-lap-dal (AmpR,Ori)-并转化至BS168 (dal)-中得到食品级重组菌BS168 (dal)-/p MA5-lap-dal (AmpR,Ori)-。该工程菌发酵产LAP无需添加抗生素且不含抗性基因。对该菌株进行5 L发酵罐条件优化,在转速300 r/min、温度33℃、p H 7. 0、分阶段补料的条件下,酶活最高达到302 U/m L。结果表明,构建的食品级重组B. subtilis产LAP具有潜在的工业应用前景。

• 单位
  工业生物技术教育部重点实验室; 江南大学