miR-15b基因干扰在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制研究

作者：宋正锋; 刘媛媛^*; 戚鹏; 谈仙星; 马磊

来源：天津医药, 2023, 51(01): 24-29.

• 再灌注损伤
• 缺氧缺血,脑
• 神经元
• RNA干扰疗法
• 微小核糖核酸-15b
• B淋巴细胞瘤-2
• 半胱氨酸蛋白酶-3
• 半胱氨酸蛋白酶-9

目的 探讨微小核糖核酸-15b(miR-15b)基因干扰对脑缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法 取新生24 h内Wistar乳鼠的大脑皮层星形胶质细胞传代培养并鉴定，氧糖剥夺/再恢复法处理模拟体内脑缺血再灌注损伤（模型组）；无特殊处理的大脑皮层星形胶质细胞为对照组。构建miR-15b干扰腺病毒载体及阴性对照载体，分别转染上述模型组细胞，记为过表达组、沉默组、过表达对照组、沉默对照组，另设置空白组。24 h后，倒置相差显微镜观察各组细胞形态学改变；氮兰四唑盐（MTS）法检测细胞存活率，乳酸脱氢酶（LDH）漏出率实验检测细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡率；实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞miR-15b以及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9 mRNA表达；Western blot检测各组细胞Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达；荧光素酶报告基因实验验证miR-15b是否靶向调控Bcl-2。结果 与对照组比，空白组、过表达对照组和沉默对照组贴壁细胞减少，细胞缩小变圆，分布松散，细胞存活率和Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低，细胞活力、凋亡率、miR-15b表达、Caspase-3和Caspase-9 mRNA及蛋白表达升高（P<0.05）；与空白组和过表达对照组比，过表达组贴壁细胞减少，分布更加稀疏，可见细胞漂浮于培养液中，细胞存活率及Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低，细胞活力、凋亡率、miR-15b表达、Caspase-3和Caspase-9 mRNA和蛋白表达升高（P<0.05）；与空白组和沉默对照组比，沉默组贴壁细胞增加，但仍低于对照组，细胞有轻微缩小，细胞存活率和Bcl-2 mRNA及蛋白表达升高，细胞活力、凋亡率、miR-15b表达、Caspase-3和Caspase-9 mRNA及蛋白表达降低（P<0.05）。荧光素酶报告基因实验结果证实miR-15b可靶向调控Bcl-2。结论 miR-15b过表达可通过线粒体途径诱导受损的神经细胞形变、凋亡，加重脑缺血再灌注损伤。

• 单位
  滕州市中心人民医院; 神经内科