氢醌对Jurkat细胞自噬及Akt/Foxo3a信号通路的影响

作者：刘欢; 姜海虹; 蔡炜; 毕勇毅; 刘旖旎; 刘歌; 王红^*

来源：公共卫生与预防医学, 2022, 33(06): 15-19.

• 氢醌
• jurkat细胞
• 细胞自噬
• 生物信息学分析
• Akt/Foxo3a信号通路

目的 探究氢醌(HQ)对人T淋巴细胞白血病系Jurkat细胞自噬相关的信号通路及其作用机制。方法 (1)取对数生长期的Jurkat细胞分别用终浓度为0μmol·L-1(对照)、12.5μmol·L-1和25μmol·L-1 HQ溶液的培养基培养24h后，采用蛋白质印迹试验(Western-Blotting)检测自噬关键蛋白P62、LC3B,免疫荧光法检测LC3荧光斑点聚集情况；(2)利用基因表达数据库，选取CD34+细胞样本中经HQ作用后差异表达的微小mRNA(miRNA),参考TargetScan、miRDB和miRwalk基因预测工具的结果，分析其可能调控的靶基因并进行信号通路富集分析；(3)根据分析结果，采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HQ染毒Jurkat细胞后蛋白激酶B/叉头框蛋白O3A (Akt/Foxo3a)信号通路中Akt、Foxo3a基因表达水平，Western-Blotting检测Akt和Foxo3a及磷酸化Akt(p-Akt)和Foxo3a(p-Foxo3a)蛋白表达水平。结果 (1)与对照组相比，25μmol·L-1浓度组自噬关键蛋白P62表达下降，12.5μmol·L-1和25μmol·L-1浓度组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高，差异均有统计学意义(P<0.05),同时免疫荧光法结果显示LC3荧光斑点聚集随HQ浓度的升高而增多；(2)经生物信息学分析后得到AMPK、MAPK、Hedgehog和PI3K/Akt等与细胞自噬相关的信号通路；(3)RT-PCR和Western-Blotting结果显示，HQ染毒组Akt/Foxo3a通路关键基因和蛋白Akt和Foxo3a的表达水平均降低，且蛋白的磷酸化水平降低，25μmol·L-1浓度组均低于12.5μmol·L-1浓度组，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 氢醌可诱导Jurkat细胞自噬水平增加，其机制可能与Akt/Foxo3a信号通路被抑制有关。

• 单位
  武汉大学; 公共卫生学院