双硫仑-铜离子复合物诱导的神经毒性研究

作者：马文青; 曲颖; 赵忠熙^*

来源：生命的化学, 2022, 42(03): 579-586.

DOI：10.13488/j.smhx.20210559

• 双硫仑联合铜
• 神经毒性
• PC12细胞
• 活性氧
• 氧化应激
• MAPK

双硫仑(disulfiram,DSF)被广泛地用于治疗肿瘤、莱姆病和可卡因成瘾等研究,而DSF的神经毒性限制了其临床应用,因此,DSF(特别是DSF-铜离子复合物)的神经毒性及其分子机制的研究具有重要的意义。将不同浓度(100 nmol/L、200 nmol/L和400 nmol/L)的DSF/Cu复合物分别作用于PC12细胞48 h后,用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)方法检测DSF/Cu复合物对细胞生存增殖的抑制;流式细胞仪检测PC12细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;试剂盒用于检测PC12细胞的丙二醛(malondialdehyde,MDA)、抗氧化因子谷胱甘肽(glutathione,GSH)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量;细胞核内DAPI染色法研究细胞凋亡程度;Western blot法检测不同浓度DSF/Cu复合物处理后PC12细胞中p38蛋白表达水平的差异;苏木素-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色检测腹腔注射给药的BALB/c-nu雄性裸鼠脑组织病理变性情况。实验结果表明,DSF/Cu复合物剂量依赖性地抑制PC12细胞的增殖,如200 nmol/L、400 nmol/L DSF/Cu复合物处理后存活率分别是54.6%和42.9%(P<0.001);DSF/Cu复合物作用24 h后,与空白对照组(Control)相比,细胞内ROS和MDA含量显著增加(P<0.001),GSH含量和SOD活力显著降低(P<0.01,P<0.001);DAPI染色说明DSF/Cu复合物引起细胞明显凋亡;Western blot分析结果表明DSF/Cu复合物显著上调了p38蛋白的表达;HE染色实验说明,DSF/Cu复合物能够引起裸鼠脑组织结构异常,出现病变。结果表明,DSF/Cu复合物可抑制PC12细胞生长并引发氧化应激,提示其存在一定的神经毒性,其机制可能为诱导细胞内ROS堆积而激活下游丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)通路,引发细胞凋亡。

• 单位
  山东大学