Rab32促进树突状细胞内BCG增殖的实验研究

作者：袁欣; 孙巧玲; 周艳萌; 秦欢; 王玉^*

来源：中国病原生物学杂志, 2022, 17(08): 896-900.

DOI：10.13350/j.cjpb.220806

• Rab32
• 卡介苗
• 树突状细胞
• PI3K/AKT通路

目的 探讨Rab32(Ras-related proteins in brain 32)在树突状细胞(dendritic cells, DCs)内卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染中的作用。方法 通过小鼠DC2.4细胞建立BCG感染模型，通过RNA-Seq技术检测BCG感染后DCs内Rab基因的表达变化；通过生信分析筛选BCG感染后差异表达的Rab蛋白；western blot法检测BCG感染后DC2.4细胞内Rab32蛋白的表达情况；采用慢病毒转染技术制备EYFP-Rab32过表达DC2.4细胞(EYFP-Rab32 DC2.4细胞),采用western blot法和流式细胞术进行转染效率验证；通过细胞载菌量实验检测EYFP-Rab32 DC2.4细胞内BCG的增殖；采用western blot法检测磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶(protein kinase B,AKT)通路蛋白的变化。结果 DC2.4细胞中存在55种Rab蛋白，BCG感染后10种Rab蛋白的表达水平发生明显变化；Rab32蛋白随着感染时间的增加而增加，感染0 h和48 h时Rab32表达显著增加(P<0.05)。BCG感染EYFP-Rab32 DC2.4细胞48 h时BCG载菌量为(60.16±4.69)×104 CFU/孔，较DC2.4细胞明显增多[(21.09±1.56)×104 CFU/孔](P<0.01);这可能与Rab32过表达导致BCG感染DC2.4细胞后p-PI3K/PI3K,p-AKT/AKT增多(P<0.05),即Rab32激活PI3K/AKT通路相关。结论 Rab32可能通过调控PI3K/AKT通路促进DCs内BCG增殖。

• 单位
  遵义医科大学; 基础医学院