E-cadherin启动子的荧光示踪体系的建立及验证

作者：谭拥军^*; 吴东丽; 余雳; 陈燕

来源：湖南大学学报(自然科学版), 2020, 47(12): 131-136.

DOI：10.16339/j.cnki.hdxbzkb.2020.12.016

• 启动子
• E-cadherin
• 示踪
• 肺癌
• 细胞

为实现对肺癌A549细胞的EMT示踪,构建了E-cadherin基因启动子的慢病毒质粒,并与包装质粒pVSVG、Δ8.91共转染HEK293T细胞,包装成有活性的慢病毒,收取病毒感染A549细胞,利用流式细胞仪和Western blot检测感染成功.进一步用TGF-β诱导感染成功的A549细胞,通过在荧光显微镜下观察荧光变化、荧光定量PCR和Western blot检测GFP和E-cadherin的变化,发现在TGF-β诱导48 h后,A549细胞形态由鹅卵石样变成长梭形.并且荧光显微镜观察到相比较于未诱导的细胞,诱导后的A549细胞绿色荧光明显变暗,同时GFP和E-cadherin的RNA水平和蛋白质表达水平均降低.以E-cadherin基因启动子为基础建立了A549细胞的EMT荧光示踪体系,为进一步研究肺癌的EMT过程提供了材料.

• 单位
  湖南大学