不同来源胰蛋白酶的基因挖掘、在Komagataella phaffii GS115的异源表达及其酶学性质分析

作者：何林曼; 钮成拓; 刘国正; 郑飞云; 刘春凤; 王金晶; 李崎^*

来源：食品与发酵工业, 2023, 1-7.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.035329

• 胰蛋白酶
• 基因挖掘
• 异源表达
• 毕赤酵母
• 酶学性质

胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，广泛应用于皮革、食品加工、生化检测和制药行业。该文旨在挖掘不同来源的胰蛋白酶，并在Komagataella phaffii GS115进行异源表达，最终分析并比较其酶学性质。通过基因挖掘手段分别克隆了人源胰蛋白酶（homo spanies trypsin，HST）、牛源胰蛋白酶（bos taurus trypsin，BTT）、虾源胰蛋白酶（penaeus vannamei trypsin，PVT）和弗氏链霉菌源胰蛋白酶（Streptomyces fradiae trypsin，SFT），以pPIC9k为载体构建重组质粒，并在Komagataella phaffii GS115中成功实现异源表达。经纯化激活后，HST，BTT，PVT，SFT的酰胺酶活性分别为18.6、12.3、44.7、13.8 U/mL；4种来源胰蛋白酶的最适温度分别为20、35、40、45 ℃，而其最适pH值分别为9、8.5、8.5、9，其中SFT在pH 9～11的稳定性更优。

• 单位
  生物工程学院; 江南大学; 工业生物技术教育部重点实验室