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摘要
为建立血清中鹅星状病毒（GoAstV）抗体检测的间接ELISA方法，本研究以GoAstV JX01/China/2021株基因组为模板优化并合成ORF2基因（1 bp～630 bp），构建重组质粒pCold I-Cap，利用原核表达系统表达GoAstV重组Cap蛋白，以NI-NTA亲和层析柱纯化的重组Cap蛋白作为包被抗原，通过优化各反应条件建立了GoAstV间接ELISA抗体检测方法。结果显示重组Cap蛋白的最佳包被浓度为2.5μg/mL,10%马血清37℃封闭90 min，待检血清稀释度为1:50，孵育时间为37℃45 min，兔抗鹅Ig G-HRP工作浓度为1:2 000,37℃孵育60 min。采用建立的间接ELISA方法对鹅细小病毒（GPV）、鹅圆环病毒（Go CV）、禽流感病毒（AIV）、新城疫病毒（NDV）、坦布苏病毒（TMUV）、鹅呼肠孤病毒（GRV）、大肠杆菌（E. coli）等鹅源阳性血清进行检测，结果显示仅GoAstV阳性血清为阳性结果，其他病原阳性血清检测结果均为阴性，特异性较强；将GoAstV阳性血清2倍倍比稀释后，利用本实验建立的GoAstV间接ELISA抗体检测方法及病毒中和试验方法同时检测，结果显示该方法的检测下限为1:400，而病毒中和试验的检测下限为1:200，表明该方法的敏感性较高；重复性试验结果显示，批内、批间变异系数均小于10%，重复性较好。利用本实验建立的方法与病毒中和试验同时检测120份鹅血清，结果显示二者的符合率为94.2%,Kappa系数为0.868，表明两种方法一致性良好。利用本研究建立的间接ELISA方法对670份采自江西及周边省份的鹅血清样品进行检测，GoAstV的检出率为32.0%(214/670)。本研究建立的检测GoAstV血清抗体的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，可为GoAstV感染的诊断及流行病学调查提供切实可行的方法。
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单位江西省农业科学院畜牧兽医研究所; 南昌市动物疫病预防控制中心; 泰和县畜牧兽医局; 吉安市畜牧兽医局
