Rab18调控禽偏肺病毒C型复制的研究

作者：张正洲; 王如嘉; 亓宇翔; 于翰哲; 孟闯; 冯旭飞^*

来源：中国兽医科学, 2023, 1-9.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2024.0054

• 禽偏肺病毒C型
• Rab18
• 病毒复制
• 相互作用
• 表达水平

为探究Rab18调控禽偏肺病毒C型(aMPV/C)复制的分子机制，将aMPV/C感染A549细胞后进行激光共聚焦显微镜观察并用Image J软件分析共定位系数。结果显示，Rab18与aMPV/C N蛋白均在细胞质表达并存在共定位，而未接毒组无明显的N蛋白荧光信号，接毒组共定位系数极显著高于未接毒组(P<0.01)。将pCMV-Flag-Rab18、pCMV-Flag、siRab18以及siNC分别转染A549细胞，接种aMPV/C后收集细胞和细胞上清，分别用qPCR、Western-blot以及TCID50检测aMPV/C N基因的转录水平、N蛋白的表达水平以及病毒效价。结果显示，过表达Rab18后aMPV/C N基因的转录水平、N蛋白的表达水平以及病毒效价均极显著升高(P<0.01)，而干扰Rab18表达后N基因的转录水平、N蛋白的表达水平以及病毒效价均极显著降低(P<0.01)。将pCMV-mcherry-Rab18分别与可融合表达GFP蛋白的aMPV/C各基因的质粒共转染A549细胞后进行激光共聚焦显微镜观察。结果显示，Rab18均可与aMPV/C 各蛋白在细胞质中发生共定位。将pCMV-Flag-Rab18分别与可融合表达GFP蛋白的aMPV/C各基因的质粒共转染HKE293T细胞后进行免疫共沉淀试验。结果显示，Rab18与aMPV/C N、M2-1和L2共表达的IP样品中出现特异性条带，其他蛋白无特异性条带。这些结果表明，Rab18通过与N、M2-1和L2蛋白的互作影响aMPV/C的复制。研究结果为进一步深入解析Rab18调控aMPV/C复制的分子机理奠定了基础。

• 单位
  扬州大学