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摘要
目的：利用mRNA转录组学与miRNA测序技术构建ApoE-/-动脉粥样硬化(AS)小鼠胆固醇代谢相关miRNA-mRNA分子网络，阐明ApoE-/-小鼠脂代谢紊乱分子机制及化瘀祛痰方调控作用。方法：10只C57BL/6J小鼠为空白对照组，20只ApoE-/-小鼠予高脂饲料喂养8周后分为模型组和中药组，每组10只。中药组予化瘀祛痰方20 g/kg体质量灌胃，其他两组予等量蒸馏水灌胃，给药8周后取材。生化分析仪检测小鼠血清血脂水平，HE染色观测肝脏组织形态学变化、油红O染色观测肝脏脂质沉积情况，mRNA转录组学与miRNA测序技术构建ApoE-/- AS小鼠胆固醇代谢相关miRNA-mRNA分子网络，qRT-PCR验证表达趋势并明确化瘀祛痰方的干预作用。结果：与空白对照组比较，模型组小鼠血清TC、TG和LDL-C水平显著上升，HDL-C水平显著下降(P<0.01)；肝脏细胞排列紊乱且肿胀，脂肪空泡变性严重，肝脏油红着色脂滴存在；胆固醇代谢相关基因SREBP2、PCSK9、LDLR、HMGCR、CYP7A1表达下调，qRT-PCR验证结果一致(P<0.01,P<0.05)。在调控他们的miRNAs中，有71个差异miRNAs，其中13个下调，58个上调，总体呈现负调控趋势，71个miRNAs与5个靶基因形成了一个分子调控网络，其中9个miRNAs对3个以上靶基因具有负调控作用，qRT-PCR验证结果一致(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较，中药组TC、TG和LDL-C水平显著降低(P<0.01)；肝脏细胞肿胀与脂肪空泡样变性明显改善，油红着色脂滴明显减少；SREBP2、PCSK9、LDLR和CYP7A1mRNA表达显著上调(P<0.01,P<0.05),miR-677-5p和miR-7043-3p显著下调(P<0.05)。结论：胆固醇代谢相关miRNA-mRNA分子网络可能在ApoE-/-小鼠脂代谢紊乱中发挥关键作用，化瘀祛痰方可能通过调控PCSK9、SREBP2、LDLR和CYP7A1改善胆固醇稳态失衡，上游机制可能与其调控miR-677-5p和miR-7043-3p有关。
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