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摘要
目的探讨牛磺酸在体外细胞培养中对草酸和草酸钙晶体诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用及机制。方法将体外培养的人远端肾小管上皮细胞(HK-2)随机分为5组:第1组,单纯HK-2细胞;第2组,HK-2细胞中加入草酸和一水草酸钙(COM);第3组,HK-2细胞中加入草酸、COM和牛磺酸;第4组,HK-2细胞中加入草酸、COM和夹竹桃麻素;第5组,HK-2细胞中加入草酸、COM和过氧化氢酶。培养6 h后收集各组细胞上清液检测乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢(H_2O_2)、8-异前列腺素(8-IP)含量及单核细胞趋化蛋白质-1(MCP-1)蛋白水平,RT-PCR法检测细胞内MCP-1 mRNA、P47phox mRNA表达水平;MTT法测定培养24 h后的细胞存活率。结果培养24 h后MTT法检测第1组细胞的吸光度A值为0.996±0.044,第2组为0.626±0.011,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。培养6 h后第1组细胞上清液H_2O_2、8-IP、LDH含量分别为(1 8.68±0.70)mmol/L、(12.72±1.69)ng/ml、(194.05±7.91)U/L,第2组分别为(53.27±1.88)mmol/L、(57.53±3.1 1)ng/ml、(484.34±29.44)U/L,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。第1组MCP-1蛋白水平为(17.32±2.32)pg/ml,第2组为(69.21±3.39)pg/ml,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。第1组与第2组细胞的MCP-1 mRNA、P47phox mRNA表达水平倍增比值分别为1/3.51和1/1.38,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。MTT法检测第3、4、5组细胞的吸光度A值分别为0.748±0.033、0.825±0.078、0.815±0.037,与第2组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。第3、4、5组细胞上清液H_2O_2、8-IP、LDH含量均明显少于第2组。第3、4、5组细胞上清液MCP-1蛋白水平分别为(60.13±1.83)、(28.53±1.41)、(56.44±1.1 3)pg/ml,与第2组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。第3、4、5组细胞MCP-1 mRNA表达水平相对第1组的倍增比值分别为1/2.55、1/1.58、1/2.37,与第2组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。第3、5组细胞P47phox mRNA表达水平相对第1组的倍增比值分别为1/1.25、1/1.35,与第2组比较差异均无统计学意义(P>0.05);第4组的倍增比值为1/0.61,与第2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论草酸、COM可诱导HK-2细胞氧化应激损伤,细胞的P47phox mRNA和MCP-1 mRNA表达增加。牛磺酸可以减轻细胞的损伤,但机制可能不是通过抑制P47phox表达的途径进行。
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